Ako vyčistiť a regenerovať kolónu po kontaminácii?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Keď je chromatografická kolóna kontaminovaná, jej chromatografické správanie sa bude trochu odlišné od chovania nekontaminovanej kolóny. Znečistené kolóny môžu spôsobiť problémy s protitlakom. Kontaminovaná kolóna s reverznou fázou sa musí vyčist......

Keď je chromatografická kolóna kontaminovaná, jej chromatografické správanie sa bude trochu odlišné od chovania nekontaminovanej kolóny. Znečistené kolóny môžu spôsobiť problémy s protitlakom. Kontaminovaná kolóna s reverznou fázou sa musí vyčistiť a regenerovať, aby sa obnovili pôvodné prevádzkové podmienky.
Kľúčom k regenerácii kontaminovanej HPLC kolóny je poznať povahu kontaminantu a nájsť vhodné rozpúšťadlo na jeho odstránenie. Ak je kontaminácia spôsobená akumuláciou silne zadržiavaných látok počas opakovaných injekcií, jednoduché kroky na odstránenie týchto kontaminantov môžu často obnoviť chromatografické správanie. Niekedy, po mnohých operáciách, sa chromatografická kolóna premyje 90-100% rozpúšťadlom B (silnejšie rozpúšťadlo v systéme s dvoma rozpúšťadlami s reverznou fázou) na 20 objemov, aby sa odstránili kontaminanty. Napríklad nevodné rozpúšťadlá, ako je metanol, acetonitril a tetrahydrofurán, sa môžu použiť na zvyškové lipidy v kolóne.

Vo všeobecnosti majú všetky spôsoby čistenia podobné formy. Použité rozpúšťadlá sa zvyšujú so silou rozpúšťadla. Posledné rozpúšťadlo je často veľmi hydrofóbne (ako je etylacetát alebo dokonca uhľovodík) a môže sa použiť na rozpustenie nepolárnych látok, ako sú lipidy a oleje. Musíme zabezpečiť, aby každé rozpúšťadlo v sérii rozpúšťadiel bolo možné zmiešať s ďalším rozpúšťadlom.
Na konci čistiaceho procesu je potrebné vrátiť sa k pôvodnému systému rozpúšťadiel pomocou stredne silného miešateľného rozpúšťadla. Napríklad izopropanol je veľmi dobré rozpúšťadlo ako medzistupeň, pretože je miešateľný s n-hexánom alebo dichlórmetánom a tiež s rozpúšťadlami vo vodnej fáze. Viskozita izopropanolu je však veľmi vysoká a je potrebné zabezpečiť nízky prietok, aby sa zabránilo nadmernému tlaku čerpadla. Pri preplachovaní chromatografickej kolóny je preplachovacia kvapalina priamo napojená na odpadovú fľašu z výstupného konca chromatografickej kolóny a nemôže pretekať cez detekčnú kyvetu, aby sa zabránilo kontaminácii detekčnej kyvety.
Chromatografická kolóna s reverznou fázou nepoužíva tlmivý roztok, na regeneráciu použite nasledujúcu sériu rozpúšťadiel:
100 % metanol → 100 % acetonitril → 75 % acetonitril-25 % izopropanol → 100 % izopropanol → 100 % metylénchlorid → 100 % n-hexán → 100 % metylénchlorid → 100 % izopropanol → 100 % acetontril
Chromatografická kolóna s reverznou fázou používa tlmivý roztok, na regeneráciu použite nasledujúcu sériu rozpúšťadiel:
voda → acetonitril → chloroform (alebo izopropanol) → acetonitril → voda.